1. 정확한 위치에서의 DNA 절단: 염기서열에 특이적인 restriction endonucleases는 클로닝에 필수적인 분자 가위 역할을 한다
2. 자기 자신을 복제할 수 있는 작은 DNA 분자를 선택: 이러한 DNA를 cloning vector라고 한다. Vector는 운반체이며 전형적으로 플라스미드 또는 바이러스의 DNA가 있다.
3. 두 DNA 조각을 공유
7R-1. 실제 PCR효율은 이론적인 것 보다 휠씬 떨어진다. 왜 PCR효율이 예상
되는 것 보다 낮아지는 지 그 이유를 설명하라.
: 이상적인 PCR반응의 효율은 100%가 되어야 하는데, 실제 PCR효율은 그것보다 떨어진다. 실제 실험의 효율은 증폭된 사이즈, 이차구조, GC의 양등이 PCR 효율에 영향을 줄 수 있다. 다
1. 서론
인간 사회의 발전과 인구의 급속한 증가는 수자원의 양과 질에 많은 압력을 가하고 있고, 전염성이 있고 물과 연관되어 있는 각종 질병들은 전 세계의 사람들의 생존에 영향을 미치고 있다. 비록 이러한 헤아릴 수 없는 질병들의 대부분이 cholera나 typhoid와 같은 고전적인 수인성 pathogen에 의해
reaction buffer, 1ⅹTAE buffer, agarose, ethidium bromide, DNA ladder, DNA loading buffer,
pipette, binding column, spindown centrifuge, Water bath, microwave, Electrophoresis tank, e-tubes, ice box, gel cast, blade, heat block, vortex, table top centrifuge
5. Procedure
1) Digestion of DNA with Restriction Enzyme
① Extracted plasmid와 buffer, DDW를 먼저 섞고 마지막에 제한효
Polymerase ChainReaction ; 중합효소연쇄반응)>
1. PCR
-극소량의 DNA 서열을 증폭시켜서 클로닝, 서열결정 혹은 다른 분석에 사용하기에 충분 한 양을 만들어 낸다. DNA 전체를 복제하는 것이 아니라 표적서열만 증폭시킨다.
2. Primer
-짧은 조각의 단일가닥 DNA로 표적 DNA의 양 끝 서열중 하나에 상보적이
primer annealing에 의한 extension을 방지할 수 있다. 이론적으로 Taq DNA polymerase는 최적 온도 이하에서도 반응이 어느 정도 진행됨으로 상온 등에서 정확하게 annealing되지 않은 primer에 의한 임의의 반응이 진행됨으로써 원하는 size의 product 이외의 non-specific product가 만들어질 수 있다.
(2) Setting up the Laboratory
Polymerase chainreaction중합효소 연쇄반응(polymerase chainreaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다
polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.
PCR의 가장 중요한 요소이며, 그것의 정확도를 결정한다. Primer의 길이는 너무 길어도 안되며 너무 짤아도 안된다. 너무 짧다면, 인간의 genome처럼 많은 양의 nucleotide로 구성 된 DNA molecule을 대상
DNA Polymerase
1. DNA Replication
: DNA topoisomerase, Helicase, Primerase, DNA Polymerase I, DNA Polymerase III, Okazaki fragment …..
2. DNA Polymerase에 대해..
: DNA Polymerase I, T4 DNA Polymerase, E. coli DNA Polymerase III, Eucaryotic DNA Polymerase.
ppt자료라서 본문을 올리기가 힘들군요.